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抗體的“存“和“取“

更新時(shí)間:2022-05-16點(diǎn)擊次數(shù):2193

一、抗體的簡(jiǎn)介
抗體是一些淋巴細(xì)胞直接抵抗外來分子所產(chǎn)生的蛋白質(zhì),它們是免疫系統(tǒng)的重要組成成分,是實(shí)驗(yàn)室的重要工具??贵w有兩個(gè)成員:多克隆抗體和單克隆抗體。多克隆抗體是用抗原注射動(dòng)物產(chǎn)生的,針對(duì)相同蛋白質(zhì)的不同抗原決定簇直接產(chǎn)生的各種不同親和性的多種免疫球蛋白的混合物。單克隆抗體是在體外制備的,是免疫淋巴瘤細(xì)胞與分泌抗體的漿細(xì)胞融合后產(chǎn)生的,整個(gè)培養(yǎng)只產(chǎn)生一種抗體(常是IgG) ,直接抵抗外來物。
二、抗體的作用

抗體可以用放射性元素或者酶來標(biāo)記,可以讓它們所識(shí)別的蛋白質(zhì)變成可見的或者是可以定量的。
1)染色細(xì)胞:標(biāo)記抗體可以用來定位細(xì)胞蛋白質(zhì)。
2)免疫沉淀:抗體可以用來檢測(cè)抗原是否存在以及其功能。

表一  免疫化學(xué)技術(shù)、多克隆抗體和單克隆抗體

技術(shù)

多克隆抗體

單克隆抗體

共聚單克隆抗體

細(xì)胞染色
免疫共沉淀
免疫印跡
免疫親和純化

一般好
一般好
一般好

抗體依賴
抗體依賴
抗體依賴
抗體依賴

很好
很好
很好

免疫方法




標(biāo)記抗體
標(biāo)記抗原

困難
一般好


抗體依賴

很好
很好

3)免疫印跡:就是我們所知道的免疫印跡法,蛋白質(zhì)是否存在以及數(shù)量都可以在濾膜上通過樣品的免疫來檢測(cè)出。
4)免疫親和:抗體所針對(duì)的蛋白質(zhì)可以直接被分離和純化。
三、抗體的貯藏

1)抗體最好貯藏在-20℃分裝,凍融對(duì)于大多數(shù)抗體都不好。

2)分裝好的抗體可以在4℃保存至少6個(gè)月。

3)加上疊氮鈉至終濃度0.02%來阻止細(xì)菌的生長(zhǎng)。

四、注意事項(xiàng)

1)要知道你的抗體是由什么動(dòng)物產(chǎn)生的,方便后續(xù)決定用什么樣的二抗。多克隆抗體通常用兔或者猴子,單克隆抗體通常用小鼠、大鼠和倉(cāng)鼠。
2)使用前離心去除所有的沉淀,在一些操作中可以阻止高背景。
3)A蛋白,從S. aureus 細(xì)胞壁中分離到的42 kDa的多肽;G 蛋白,從β溶血鏈球菌中分離到的30-35 kDa 的多肽,都與抗體有強(qiáng)烈的結(jié)合,它們被用來免疫沉淀或者定位抗體。A蛋自和G蛋白都可以用來與珠子結(jié)合或者標(biāo)記,適用于大部分的抗體亞類。

 


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