JLZZJLZZJLZZ,亚洲日韩图区一区二区,欧美福利午夜久久,久久精品岛国av一区二区无码

15522676233
TECHNICAL ARTICLES

技術(shù)文章

當(dāng)前位置:首頁(yè)技術(shù)文章Lipo3000細(xì)胞轉(zhuǎn)染的實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)

Lipo3000細(xì)胞轉(zhuǎn)染的實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)

更新時(shí)間:2024-04-08點(diǎn)擊次數(shù):19230

細(xì)胞轉(zhuǎn)染常用的轉(zhuǎn)染試劑很多,其中,Lipo3000深受廣大科研工作者的喜愛,那我們來(lái)看看Lipo3000細(xì)胞轉(zhuǎn)染的實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)吧!

一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

Lipofectamine™ 3000 轉(zhuǎn)染試劑(Thermo Fisher)、Opti-MEM(可以用無(wú)血清的培養(yǎng)基代替)

二、實(shí)驗(yàn)步驟

1.接種細(xì)胞,使其在轉(zhuǎn)染時(shí)達(dá)到7090% 匯合度。

注:對(duì)于HEK293,6孔板一般鋪50萬(wàn)個(gè)細(xì)胞左右。對(duì)于PC9, 24孔板一般鋪5-10萬(wàn)個(gè)細(xì)胞。由于不同細(xì)胞,生長(zhǎng)狀況不太一樣,需要根據(jù)情況調(diào)整。

2. 使用Opti-MEM培養(yǎng)基稀釋Lipofectamine3000 劑,充分混勻。

3.使用Opti-MEM培養(yǎng)基稀釋DNA,制備 DNA 預(yù)混液,然后添加P3000 試劑,充分混勻。

4.將上面兩步溶液合在一起,混勻并孵育10-15mins。

5.將混勻后的溶液加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中,并輕輕搖晃培養(yǎng)基,使其均勻。

6.37°C 孵育細(xì)胞 24 天,然后分析轉(zhuǎn)染細(xì)胞。

轉(zhuǎn)染量:

組分

96

24

6

DNA/

100ng

500ng

2500ng

P3000TM/

0.2μL

1μL

5μL

Lipofectamine™ 3000/

0.150.3μL

0.751.5μL

3.757.5μL

三、注意事項(xiàng)

1.Opti-MEM需要37℃水浴鍋預(yù)熱。

2.轉(zhuǎn)染 siRNA 至細(xì)胞時(shí),在稀釋 siRNA 時(shí)不要加入 P3000 試劑。

3.關(guān)于Lipo3000的用量,比如6孔板推薦用量有兩個(gè)3.75ul7.5ul,最di看轉(zhuǎn)染xiao率,最高看細(xì)胞耐受。

4. Opti-MEMLipo3000預(yù)混及Opti-MEM、質(zhì)粒及P3000預(yù)混,都不需要各自孵育,而且兩者混合后孵育時(shí)間最多不要超過(guò)15mins。

5.轉(zhuǎn)染中和轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞培養(yǎng)基中最好不要含有雙抗。

對(duì)于比較好轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,如HEK293,而且需要大量轉(zhuǎn)染的時(shí)候,可以使用PEI進(jìn)行轉(zhuǎn)染,畢竟Lipo3000比較貴。例如,在做CO-IP實(shí)驗(yàn)時(shí),需要10cm皿轉(zhuǎn)染好幾種質(zhì)粒,就可以用PEI進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染。CO-IP步驟見免疫共沉淀Co-IP實(shí)驗(yàn)步驟。

更多有關(guān)Lipo3000細(xì)胞轉(zhuǎn)染的實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)的內(nèi)容,請(qǐng)聯(lián)系Lipo3000細(xì)胞轉(zhuǎn)染代理——北京百奧創(chuàng)新科技有限公司:

image.png



聯(lián)系方式

15522676233

(全國(guó)服務(wù)熱線)

北京市海淀區(qū)溫泉鎮(zhèn)創(chuàng)客小鎮(zhèn)社區(qū)配套商業(yè)樓

3007606172@qq.com

關(guān)注我們

Copyright © 2025北京百奧創(chuàng)新科技有限公司 All Rights Reserved   工信部備案號(hào):京ICP備17019404號(hào)-2

技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng)   管理登錄   sitemap.xml

關(guān)注

聯(lián)系
聯(lián)系
頂部
亚洲综合夜网站在线观看| 色呦呦在线高清| 亚洲成人av系列| 在线 一区二区 中文| 国产综合 自拍 在线| 一区二区韩国无码视频麻豆| 国产乱伦大杂烩一区二区| 国产影视在线一区二区AV福利| 亚洲欧洲国产免费| 91华人偷拍| 日韩欧美分区成人午夜在线免费观看| 国产资源精品| 精品久久久久久999| 一区二区中文幕| 青青草成人综合视频网站国产| 三点美女操逼| 88在线中文字幕| 欧美不卡视频三区四区| 中出无码中文字幕在线| 走光见毛一区两区三区| 国产 欧美 日韩 在线 久久| 亚洲精品午夜无码电影网| 亚洲伦理天堂在线播放| 中文字幕在线色资源| 好吊妞这里这有精 | 另类在线91| 97在线播放视频| 麻豆成人在线视频看看| ww国产高清| 亚洲欧美色一区二区三区,| 亚洲系列国产欧美,日韩| 亚洲午夜小电影| 亚洲有码视频在线看| 欧美日韩亚洲一区二区三区啊| 0668qp.com| 欧美成人午夜一级尿视频网站| 欧美一级特黄久久久一区| 青青操视频网站免费| 激情视频日韩| 日韩一区三级| 欧美美女鸡巴|