JLZZJLZZJLZZ,亚洲日韩图区一区二区,欧美福利午夜久久,久久精品岛国av一区二区无码

15522676233
TECHNICAL ARTICLES

技術(shù)文章

當(dāng)前位置:首頁(yè)技術(shù)文章蛋白質(zhì)提純的注意事項(xiàng)和常見問題有什么?

蛋白質(zhì)提純的注意事項(xiàng)和常見問題有什么?

更新時(shí)間:2023-09-22點(diǎn)擊次數(shù):1665

在進(jìn)行任何一種蛋白質(zhì)純化的時(shí)候,都要時(shí)刻注意維護(hù)它的穩(wěn)定性,保護(hù)它的活性,那么你知道蛋白質(zhì)提純的注意事項(xiàng)和常見問題有什么嗎?讓我們一起來(lái)看看吧!

一、注意事項(xiàng):

1、操作盡可能置于冰上或者在冷庫(kù)內(nèi)進(jìn)行。

2、濃度不要太稀,蛋白濃度維持在μg/mL~mg/mL。

3、選擇合適的pH,除非是進(jìn)行聚焦層析,所使用的緩沖溶液pH避免與pI相同,防止蛋白質(zhì)的沉淀。

4、使用蛋白酶抑制劑,防止蛋白酶對(duì)目標(biāo)蛋白的降解;在純化細(xì)胞中的蛋白質(zhì)時(shí),加入DNA酶,降解DNA,防止DNA對(duì)蛋白的污染。

5、避免樣品反復(fù)凍融和劇烈攪動(dòng),以防蛋白質(zhì)的變性。

6、緩沖溶液成分盡量模擬細(xì)胞內(nèi)環(huán)境。

7、在緩沖溶液中加入0.1~1mmol/LDTT(二硫蘇糖醇)(或β-巰基乙醇),防止蛋白質(zhì)的氧化。

8、加1~10mmol/LEDTA金屬螯合劑,防止重金屬對(duì)目標(biāo)蛋白的破壞。

9、使用滅菌溶液,防止微生物生長(zhǎng)。

二、常見問題:

1、通過 His 標(biāo)簽純化的蛋白,雜帶比較多,如何改進(jìn)?

(1)如果純化的是上清,蛋白酶會(huì)部分降解目的蛋白,可通過加多種蛋白酶抑制劑改進(jìn)。

(2)可提高雜蛋白與鎳柱結(jié)合起始咪唑濃度,以降低雜蛋白與鎳柱的親和力。

(3)雜蛋白和目的蛋白結(jié)合,可通過超聲前加入去垢劑的方式消除(1%-2%Tritonx-100)。

2、鎳柱使用中出現(xiàn)棕色的原因

(1)柱子發(fā)生堵塞,可能是樣品中細(xì)胞碎片或其他雜顆粒所致,所以樣品一定要高速離心,并過0.22或者0.45的膜。

(2)上清純化時(shí),蛋白發(fā)生變性,有絮狀物產(chǎn)生,趕緊加入 1-2mM DTT (上清樣品處理要在冰浴中進(jìn)行),還不行加尿素變性,使其在變形環(huán)境下。

(3)樣品處理時(shí)的料液比不要太小,否則黏度大,或者導(dǎo)致蛋白析出或變性,料液比要在 1/10-1/15 之間較適宜。

3、純化過程中蛋白出現(xiàn)了渾濁應(yīng)如何處理?

(1)出現(xiàn)渾濁,說明蛋白處在不穩(wěn)定的環(huán)境中或者自身就不穩(wěn)定,所以要檢查緩沖體系是否正確,環(huán)境是否低溫,或在緩沖液中加入還原劑 DTT。

(2)加入肌氨酸鈉,迅速使蛋白變性,消除渾濁現(xiàn)象。

更多有關(guān)蛋白質(zhì)提純的注意事項(xiàng)和常見問題,請(qǐng)聯(lián)系北京百奧創(chuàng)新科技有限公司:


聯(lián)系方式

15522676233

(全國(guó)服務(wù)熱線)

北京市海淀區(qū)溫泉鎮(zhèn)創(chuàng)客小鎮(zhèn)社區(qū)配套商業(yè)樓

3007606172@qq.com

關(guān)注我們

Copyright © 2025北京百奧創(chuàng)新科技有限公司 All Rights Reserved   工信部備案號(hào):京ICP備17019404號(hào)-2

技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng)   管理登錄   sitemap.xml

關(guān)注

聯(lián)系
聯(lián)系
頂部
久久伦理精品99| 热久综合网| 亚州有码视频在线| 在线播放中山文香二区三| 综合91日韩| 国产人妻精品无码av探花网站| 嫩草91一区二区国产中文| 日本不卡App网站| 女同精一区| 国产精品高清无码一区二区三区不卡| 久久久92人妻| 欧美一级aaa爱片久久久| 天堂五月视频| 日韩欧美激情亚洲| 精品美女电影| 午夜寻花高颜值在线| 久久天天射综合网| 久久欧洲亚洲中文字幕| 日本不卡精品| 欧美精品妻| 人人妻与人人操三级| 啊 嗯好舒服视频| 亚洲欧美日本一日一射| 一级日韩在线观看欧美三级 | 韩国日本久久一区二区三区| 欧美精选国产精品| 福利三级一区二区三区| 欧美日韩一区二区网站| 午夜成人福利视频一区二区| 婷婷五月天在线欧美激情 | 日本美女-区二区三区三级片| 91国产电影一区二区| 99在线观看超碰| 伊人在线一区| 中文字幕免费一区二区三区| 欧美最猛黑人XXXX黑人猛交| 天天操av天天日AV| 97超碰日韩无码| 日本怡红在线| 狠狠搞少妇网站上| 在线视频免费国产一区二区 |