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DNA的濃度和純度檢測(cè)方法

更新時(shí)間:2023-12-05點(diǎn)擊次數(shù):5863
 你知道DNA的濃度和純度的檢測(cè)方法有什么嗎?讓我們一起來(lái)看看吧!

目前常用紫外分光光度法檢測(cè)核酸的濃度及純度。

一、檢測(cè)原理

紫外分光光度法基于DNA鏈上堿基的苯環(huán)結(jié)構(gòu)在紫光區(qū)具有較強(qiáng)吸收,DNA/RNA260nm處有最大的吸收峰,蛋白質(zhì)在280nm處有最大的吸收峰,鹽和小分子則集中在230nm處。因此,可以用260nm波長(zhǎng)進(jìn)行分光測(cè)定核酸濃度,OD值為1相當(dāng)于大約50ug/ml雙鏈DNA,單鏈DNA濃度約為33ug/mlRNA約為40ug/ml,寡核苷酸約為35ug/ml。如用H,O稀釋DNA/RNA樣品n倍并以H,O為空白對(duì)照,根據(jù)此時(shí)讀出的OD260值即可計(jì)算出樣品稀釋前的濃度

二、DNA純度比值

DNA 純度比值是表示DNA樣本中 DNA 的相對(duì)濃度的指標(biāo),它是通過(guò)測(cè)量樣本中不同物質(zhì)的含量來(lái)計(jì)算的。A280nm是蛋白和酚類物質(zhì)最高吸收峰的吸收波長(zhǎng),純DNAA260/A280比值為1.8,純RNA2.0。假如比值低,表示受到蛋白(芳香族)或分類物質(zhì)的污染,需要純化樣品。比值=1.5相當(dāng)于50%蛋白質(zhì)/DNA溶液。A230nm是碳水化合物最高吸收峰的吸收波長(zhǎng),純DNARNAA260/A230比值為2.5。若比值小于2.0標(biāo)明樣品被碳水化合物(糖類)、鹽類或有機(jī)溶劑污染,需要純化樣品。

三、DNA純度比值可能受到以下因素的影響

1. 樣本收集和存儲(chǔ)方法:樣本在收集和存儲(chǔ)過(guò)程中可能會(huì)受到污染,影響DNA純度。

2. DNA 提取方法:不同的DNA提取方法可能導(dǎo)致DNA純度的不同。

3. 生物樣本的特性:不同的生物樣本中的DNA含量和組成也可能導(dǎo)致DNA純度的不同。

4. 純化步驟:在純化DNA時(shí),不同的純化方法和操作步驟可能對(duì)DNA純度產(chǎn)生影響。

5. 測(cè)量方法:不同的測(cè)量方法可能產(chǎn)生不同的DNA純度比值。

因此,為了確保DNA純度的準(zhǔn)確性,需要在每個(gè)步驟中注意控制可能影響DNA純度的因素,并使用適當(dāng)?shù)姆椒ê图夹g(shù)進(jìn)行測(cè)量。

更多有關(guān)DNA的濃度和純度檢測(cè)方法,請(qǐng)聯(lián)系北京百奧創(chuàng)新科技有限公司。

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