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細(xì)胞消化的方法有什么

更新時(shí)間:2024-01-26點(diǎn)擊次數(shù):830
  細(xì)胞消化的方法有什么
  在貼壁細(xì)胞傳代前必需將細(xì)胞與貼附介質(zhì)分離,常見的方式就是通過胰蛋白酶對細(xì)胞進(jìn)行消化。那么你知道細(xì)胞消化的方法有哪些嗎?讓我們一起來看看吧!
  一、機(jī)械消化法
  直接用液體吹打或用刮刀,施予外力讓細(xì)胞與培養(yǎng)底物分離;適用于貼壁性弱的細(xì)胞傳代,但相較于其它消化方法,這種外力無法量化控制,細(xì)胞分散效果差,且可能會造成大量細(xì)胞破損,使內(nèi)容物釋放到培養(yǎng)基,進(jìn)而影響細(xì)胞傳代狀態(tài)。
  二、離子螯合法
  細(xì)胞膜表面蛋白大多需要鈣、鎂離子來維持與胞外基質(zhì)的穩(wěn)定鍵結(jié),當(dāng)然也包含各種黏附蛋白(例:整合素、鈣黏著蛋白、橋粒等),螯合劑會在不破壞細(xì)胞膜表面蛋白的狀況下,抽離這些離子,使黏附蛋白失活而減少細(xì)胞-細(xì)胞間及細(xì)胞-底物間的連接作用,讓細(xì)胞較容易在施予外力時(shí),脫離培養(yǎng)底物并促進(jìn)細(xì)胞分散。
  0.02%EDTA是細(xì)胞傳代常用的離子螯合劑,在37℃作用效果佳(消化較敏感的細(xì)胞可在4℃作用),適用于消化一般貼壁性細(xì)胞或細(xì)胞表面標(biāo)記實(shí)驗(yàn)細(xì)胞。但EDTA無法用血清終止其反應(yīng),所以在消化細(xì)胞后必須用緩沖鹽溶液(如:PBS)清洗離心,以免影響后續(xù)細(xì)胞貼盤效果。
  三、酶消化法
  用蛋白水解酶消化連接細(xì)胞及培養(yǎng)底物的蛋白質(zhì),適用于消化貼壁性稍強(qiáng)的細(xì)胞。
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