活性氧檢測使我們在細(xì)胞研究中非常重要的一個實驗，檢測細(xì)胞內(nèi)ROS水平對于理解一些藥物作用的信號通路和潛在作用機制具有重要意義。

活性氧檢測試劑盒(Reactive Oxygen Species Assay Kit，也稱ROS Assay Kit)是一種利用熒光探針DCFH-DA進行活性氧檢測的試劑盒。

DCFH-DA是比較常用的醫(yī)腫活性氧檢測探針，探針本身沒有熒光，可以自由出入細(xì)胞，當(dāng)進入到細(xì)胞內(nèi)后，會被脂酶水剪成DCFH，DCFH是有熒光的，通過488nm（藍光）激發(fā)之后，使用FITC（525nm）熒光通道進行檢測，觀測陽性比例以及mean值的變化來反應(yīng)被氧化的水平~

碧云天活性氧檢測試劑盒(S0033S)提供了活性氧陽性對照試劑Rosup，以便于活性氧的檢測。Rosup是一種混合物(compound mixture),濃度為50mg/ml。

使用說明：

1. 裝載探針

對于刺激時間較短(通常為2小時以內(nèi))的細(xì)胞，先裝載探針，后用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細(xì)胞。對于細(xì)胞刺激時間較長(通常為6小時以上)的細(xì)胞，先用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細(xì)胞，后裝載探針。

2. 檢測

對于原位裝載探針的樣品可以用激光共聚焦顯微鏡直接觀察，或收集細(xì)胞后用熒光分光光度計、熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀檢測。對于收集細(xì)胞后裝載探針的樣品可以用熒光分光光度計、熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀檢測，用激光共聚焦顯微鏡直接觀察也可以。

3. 參數(shù)設(shè)置

使用488nm激發(fā)波長，525nm發(fā)射波長，實時或逐時間點檢測刺激前后熒光的強弱。DCF的熒光光譜和FITC非常相似，可以用FITC的參數(shù)設(shè)置檢測DCF。

4. 其它說明

陽性對照可以按照1:1000的比例使用。例如裝載好探針的細(xì)胞共1毫升，可以加入1微升的陽性對照刺激。通常刺激后20-30分鐘內(nèi)可以觀察到非常顯著的活性氧水平升高。對于不同的細(xì)胞，活性氧陽性對照的效果可能有較大的差別。如果在刺激后30分鐘內(nèi)觀察不到活性氧的升高，可以適當(dāng)提高活性氧陽性對照的濃度。如果活性氧升高得過快，可以適當(dāng)降低活性氧陽性對照的濃度。

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