Elabscience丙二醛(MDA)比色法測(cè)試盒(測(cè)細(xì)胞)適用于檢測(cè)細(xì)胞樣本中的丙二醛含量。

過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物中的丙二醛(MDA)在高溫及酸性環(huán)境下可與硫代ba比妥酸(TBA)反應(yīng)產(chǎn)生紅棕色產(chǎn)物 3,5,5’-三甲基惡唑 2,4-er酮(三甲川)，該物質(zhì)在 532 nm 處有最大吸收峰。

試劑準(zhǔn)備

① 檢測(cè)前，試劑盒中的試劑平衡至室溫。

② 試劑一2-8℃存放時(shí)會(huì)凝固，使用前37℃加熱，直到透明液體方可使用。

③ 試劑三若有析出，需在80℃加熱溶解，冷卻后使用。

④ 試劑二應(yīng)用液的配制：

按試劑二：雙蒸水= 1.2:34的比例進(jìn)行配制，2-8°C保存3個(gè)月。

⑤ 工作液的配制：

按試劑一：試劑二應(yīng)用液：試劑三= 0.2:3:1的比例進(jìn)行配制，現(xiàn)配現(xiàn)用。

實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵點(diǎn)

① 水浴反應(yīng) 40 min 時(shí)溫度要控制在 95-100°C。

② 吸取上清液到酶標(biāo)板時(shí)，防止產(chǎn)生氣泡。

③ 試劑三中若有析出，需 80℃水浴加熱溶解后使用。

操作步驟

① 空白管：取 0.1 mL 無水乙醇，加入到 1.5 mL EP 管中。

標(biāo)準(zhǔn)管：取 0.1 mL 10 nmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)品，加入到對(duì)應(yīng)的 1.5 mL EP 管中。

樣本管：取 0.1 mL 待測(cè)樣本，加入到 1.5 mL EP 管中。

② 向①中各管加入 1 mL 工作液。

③ EP 管口用保鮮膜扎緊，充分混勻，并在保鮮膜上扎一個(gè)小孔，100°C水浴 40 min。

④ 流水冷卻至室溫，1078×g 離心 10 min。

⑤ 用微量移液器取上清液 0.25 mL 到酶標(biāo)板。(不能將沉淀加入酶標(biāo)板中)。

⑥ 酶標(biāo)儀上測(cè)定 532 nm 處的 OD 值。

注：如果不用保鮮膜，可先用注射器針頭在 EP 管蓋上扎一個(gè)小孔，防止水浴時(shí)，管蓋崩開。

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