siRNA轉(zhuǎn)染

1. siRNA導(dǎo)入細胞的方法

siRNA導(dǎo)入細胞的方法有化學(xué)轉(zhuǎn)染技術(shù)、電穿孔法、磷酸鈣共沉淀技術(shù)、顯微注射和載體導(dǎo)入技術(shù)等。技術(shù)的選擇要考慮轉(zhuǎn)入時細胞的承受能力、細胞對病毒感染的敏感性、細胞生長特性等實驗條件的限制。對于貼壁細胞來講化學(xué)轉(zhuǎn)染技術(shù)比較合適，而對于懸浮細胞，電穿孔更有效。

2. 轉(zhuǎn)染試劑的選擇

在選擇轉(zhuǎn)染試劑時，首先考慮的是特定的細胞株，而不是被導(dǎo)入細胞中的物質(zhì)。在試劑的選擇上建議選擇線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。

3. 篩選轉(zhuǎn)染試劑

好的轉(zhuǎn)染試劑有以下特點：如下表

4. 細胞在轉(zhuǎn)染過程中死亡的處理方法

如果細胞在轉(zhuǎn)染后大多數(shù)死亡，那就說明轉(zhuǎn)染條件不適合細胞生存，需要進行進一步的優(yōu)化。在優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件時需要考慮的因素：轉(zhuǎn)染試劑（線性PEI轉(zhuǎn)染試劑）和細胞特異性條件。例如：siRNA與轉(zhuǎn)染試劑的比例、轉(zhuǎn)染時間、細胞傳代數(shù)和細胞密度等。

5. 提高難以轉(zhuǎn)染的細胞轉(zhuǎn)染效率的方法以及轉(zhuǎn)染效率的確定

如何提高難轉(zhuǎn)染細胞的轉(zhuǎn)染效率是目前研究的一個技術(shù)難題。一般推薦使用電轉(zhuǎn)移法，該方法對細胞的損傷比較大，所以這種方法不太合適。熒光標(biāo)記siRNA是熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡和流式細胞術(shù)常用的檢測轉(zhuǎn)染效率的方法。

6. 轉(zhuǎn)染后細胞死亡的原因及轉(zhuǎn)染條件的優(yōu)化

選擇像線性PEI轉(zhuǎn)染試劑這種毒性小的轉(zhuǎn)染試劑也可以達到優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件的目的。另外，如果siRNA靶向的基因?qū)S持細胞生長非常重要，那么細胞死亡的現(xiàn)象可能是由基因干擾。如果檢測受到細胞死亡的影響，可以適當(dāng)調(diào)整檢測時間。