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如何區(qū)分各種PCR技術?

更新時間:2023-09-08點擊次數(shù):1530

PCR是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術,PCR技術有很多,那么我們應該如何區(qū)分各種PCR技術呢?讓我們一起來看看吧!

一、普通PCR

PCR是普通PCR,以雙鏈DNA為模板,以dNTP為底物,特異性地擴增雙鏈DNA。然后采用瓊脂糖凝膠電泳對產(chǎn)物進行檢測,只能做定性分析。

二、實時熒光定量PCR

qPCR和Real-time PCR是實時熒光定量PCR,以cDNA為模板,以dNTP為底物,對擴增出的DNA進行定量分析。實時熒光定量PCR常用的方法:水解探針法和熒光染料法。

三、逆轉錄PCR

RT-PCR 是逆轉錄PCR,采用 Oligo(dT) 或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成 cDNA,再以 cDNA 為模板進行 PCR 擴增,結果只能定性,不能定量。

四、實時熒光定量逆轉錄PCR

RT-qPCR是實時熒光定量逆轉錄PCR,是qPCR+RT-PCR的組合,將總RNA或mRNA逆轉錄成cDNA后再作為模板,以dNTP為底物,進行qPCR的定量分析。

五、數(shù)字PCR

dPCR是數(shù)字PCR即三代PCR,是一種能夠實現(xiàn)核酸絕對定量的精準檢測技術,基于泊松分布原理將核酸樣品分配到大量獨立、平行的微反應單元(納升級)中,使每個反應室中平均只有一個拷貝或者沒有目標DNA分子,然后加入熒光信號進行擴增,從而實現(xiàn)靶標核酸分子的絕對計數(shù),提高檢測靈敏度和準確度。

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