技術(shù)文章
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細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA,RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展,轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具。在研究基因功能、調(diào)控基因表達(dá)、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗中,其應(yīng)用越來越廣泛。轉(zhuǎn)染,是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入,轉(zhuǎn)染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過物理方法將基因?qū)爰?xì)胞的范例;化學(xué)介...
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轉(zhuǎn)染前準(zhǔn)備:材料:293T細(xì)胞(其他的細(xì)胞系種類)、MyoD表達(dá)質(zhì)粒和EGFP表達(dá)質(zhì)粒、DMEM培養(yǎng)基、鏈霉素/青霉素(雙抗)、FCS(小牛血清)、PBS(磷酸鹽緩沖溶液)、胰酶/EDTA消化液、轉(zhuǎn)染試劑(TransFast)器材:20ul/200ul/1ml微量移液器和Tip頭、酒精燈、廢液缸、血球計數(shù)板、渦旋振蕩器、恒溫水浴箱、臺式離心機(jī)、35mm培養(yǎng)皿、轉(zhuǎn)染管、15ml離心管、觀察用倒置顯微鏡熒光顯微鏡和CCD1、細(xì)胞傳代培養(yǎng):取出細(xì)胞群,去除培養(yǎng)基,使用PBS清洗2次...
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流式細(xì)胞儀檢測樣品推薦制備方法:A.直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體):(1)、收集1×106個細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。(2)、用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2mlPBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。(3)、用1ml含5%人血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個細(xì)胞/20ul抗體)的PBS,避...
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美國MatreyaLLC抗體是指機(jī)體由于抗原的刺激而產(chǎn)生的具有保護(hù)作用的蛋白質(zhì)。它(免疫球蛋白不僅僅只是抗體)是一種由漿細(xì)胞(效應(yīng)B細(xì)胞)分泌,被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細(xì)菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì),僅被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動物的血液等體液中,及其B細(xì)胞的細(xì)胞膜表面??贵w能識別特定外來物的一個*特征,該外來目標(biāo)被稱為抗原。美國MatreyaLLC抗體是具有4條多肽鏈的對稱結(jié)構(gòu),其中2條較長、相對分子量較大的相同的重鏈(H鏈);2條較短、相對分子量較小的相同的輕鏈(L鏈)。鏈...
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